VALIDASI METODE ANALISIS OSELTAMIVIR PHOSPHATE PADA PLASMA MANUSIA MENGGUNAKAN HPLC-UV YANG DIKEMBANGKAN DENGAN METODE PREPARASI SOLID PHASE EXTRACTION

Latar Belakang. Oseltamivir fosfat merupakan prodrug antivirus yang digunakan secara luas dalam terapi dan profilaksis influenza A dan B. Pengembangan sediaan generik oseltamivir fosfat dilakukan karena obat tersebut telah habis masa patennya. Salah satu syarat krusial dalam registrasi obat generik adalah melalui uji bioekivalensi (BE) untuk memastikan efikasi dan keamanannya setara dengan obat inovator. Oleh karena itu, diperlukan pengembangan metode analisis yang efisien untuk meminimalkan efek matriks dan meningkatkan perolehan kembali analit pada plasma manusia. Tujuan. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan kondisi kromatografi optimal, prosedur preparasi sampel dengan ekstraksi fase padat yang efektif, serta validasi metode analisis oseltamivir fosfat dalam plasma manusia sesuai pedoman ICH M10. Metode. Analisis dilakukan dengan sistem HPLC-UV menggunakan kolom COSMOSIL Packed Column 5C18-AR-II (150 mm x 4,6 mm; 5 µm). Fase gerak dioptimasi menggunakan campuran asetonitril dan TEA 0,1% pH 7,2 (50:50) dengan laju alir 1 mL/menit pada panjang gelombang 230 nm, volume injeksi 20 μL, dan suhu kolom 40 C. Preparasi sampel plasma manusia dilakukan menggunakan teknik ekstraksi fase padat dengan kartrid C18. Metode validasi dievaluasi berdasarkan parameter selektivitas, efek matriks, linearitas, akurasi, presisi, carry-over, stabilitas, dan reinjection reproducibility. Hasil. Waktu retensi analit 2.721 menit dan IS 3.167 menit. Parameter kurva kalibrasi menunjukkan linearitas yang sangat baik pada rentang konsentrasi 0,5-16 ppm dengan koefisien korelasi (r2) 0,9994 dan persamaan regresi 20390x-4461,8 dengan LOD dan LOQ untuk oseltamivir fosfat masing-masing diperoleh 0,00983 dan 0,02978. Pengujian carry over menunjukkan hasil 0% terhadap respons LLOQ maupun IS. Parameter akurasi presisi menunjukkan nilai perolehan kembali 83-112% dan %CV <11% sehingga memenuhi persyaratan. Uji stabilitas menunjukkan analit tetap stabil dalam plasma selama penyimpanan dengan nilai perolehan kembali 85-109% dan %CV <10%. Selain itu, efek matriks dan reinjection reproducibility memenuhi persyaratan serta menunjukkan bahwa sistem kromatografi tetap konsisten meskipun dilakukan injeksi berulang. Kesimpulan. Metode HPLC-UV dengan preparasi SPE yang dikembangkan dalam penelitian ini telah sepenuhnya memenuhi kriteria validasi sesuai pedoman ICH M10. Metode ini berhasil menganalisis oseltamivir fosfat dalam plasma manusia dengan waktu retensi lebih cepat.