KONSTRUKSI DAN KLONING Rv3875 dan Rv2873 DARI Mycobacterium tuberculosis SEBAGAI POTENSI PROTEIN SUBUNIT DALAM IMUNODIAGNOSTIK TUBERKULOSIS = CONTRUCTION AND CLONING OF Rv3875 and Rv2873 FROM Mycobacterium tuberculosis AS POTENTIAL SUBUNIT PROTEINS FOR TUBERCULOSIS IMMUNODIAGNOSTICS

Latar Belakang. Tuberkulosis (TB) tetap menjadi penyebab utama kematian akibat penyakit menular di seluruh dunia, sementara efektivitas vaksin Bacille Calmette-Guérin (BCG) terhadap TB paru pada remaja dan dewasa masih bervariasi serta tidak mampu mencegah infeksi primer maupun reaktivasi laten, sehingga diperlukan kandidat protein subunit baru yang lebih spesifik dan imunogenik. Tujuan. Penelitian ini bertujuan mengonstruksi, mengkloning, dan mengekspresikan gen Rv3875 (ESAT-6) dan Rv2873 (MPT83) dari Mycobacterium tuberculosis H37Rv serta mengevaluasi karakteristik imunoinformatika kedua protein tersebut. Metode. DNA genomik diekstraksi menggunakan gSYNC DNA Extraction Kit, diikuti amplifikasi gen Rv3875 (288 bp) dan Rv2873 (663 bp) dengan primer spesifik yang mengandung situs restriksi BamHI dan HindIII, dilanjutkan pemurnian fragmen PCR, restriksi ganda, ligasi ke vektor pTrcHis A, serta transformasi plasmid rekombinan ke Escherichia coli DH5α untuk kloning dan BL21 untuk ekspresi protein menggunakan induksi IPTG. Identifikasi koloni positif dilakukan melalui seleksi biru-putih, PCR koloni, isolasi plasmid, dan konfirmasi sekuensing, sedangkan ekspresi protein dianalisis menggunakan SDS-PAGE 4–20%. Uji in silico dilakukan untuk menilai antigenisitas (VaxiJen), alergenisitas (AllerTOP), toksisitas (ToxinPred2), prediksi domain transmembran (DeepTMHMM), sinyal sekresi (SignalP 6.0), serta pemetaan epitop sel T CD4⁺ (MHC-II), sel T CD8⁺ (MHC-I), dan epitop B cell menggunakan IEDB untuk mengevaluasi potensi imunogenisitas dan keamanan epitop kandidat. Hasil. Gen Rv3875 dan Rv2873 berhasil dikonstruksi dan dikloning dengan kesesuaian sekuens >99% terhadap referensi GenBank, serta menghasilkan ekspresi protein rekombinan ESAT-6 (~9,9 kDa) dan MPT83 (~22 kDa) pada E. coli BL21 setelah induksi IPTG. Analisis in silico menunjukkan bahwa kedua protein memiliki antigenisitas tinggi (VaxiJen >0,4), bersifat non-alergenik dan non-toksik, tidak memiliki domain transmembran, serta memiliki sinyal sekresi positif, dengan prediksi epitop menunjukkan adanya sejumlah epitop sel T CD4⁺ dan CD8⁺ dengan afinitas pengikatan kuat terhadap alel HLA yang umum pada populasi Asia Tenggara, serta keberadaan epitop B cell potensial yang mendukung pengenalan antigen oleh sistem imun humoral. Analisis keamanan epitop menunjukkan bahwa beberapa epitop kandidat bersifat antigenik, non-alergenik, dan non-toksik. Kesimpulan. Penelitian ini berhasil menghasilkan konstruksi gen rekombinan Rv3875 dan Rv2873 yang stabil serta ekspresi protein subunit dengan sifat imunogenik yang kuat, sehingga berpotensi digunakan untuk pengembangan imunodiagnostik spesifik maupun vaksin subunit terhadap Mycobacterium tuberculosis.