Ligasi Gen Rv3875 Mycobacterium tuberculosis ke Vektor Ekspresi pTrcHis A dan Transformasi ke Escherichia coli BL21 = Ligation of Rv3875 Gene from Mycobacterium tuberculosis to pTrcHis A Expression Vector and Transformation to Escherichia coli BL21

Latar belakang. Tuberkulosis (TB) disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis menjadi masalah kesehatan global. Gen Rv3875, yang mengkode protein ESAT-6 (Early Secreted Antigenic Target 6) memainkan peran penting dalam patogenesis TB dan merupakan target potensial untuk diagnosis dan vaksin. Tujuan. Penelitian ini bertujuan untuk meligasi gen Rv3875 M. tuberculosis ke vektor ekspresi pTrcHis A, transformasi ke Escherichia coli BL21, dan karakterisasi klon rekombinan. Metode. DNA M. tuberculosis diekstraksi dari sampel klinis dan amplifikasi gen Rv3875 menggunakan PCR. Produk PCR kemudian dipurifikasi lalu direstriksi dengan enzim BamHI dan HindIII, kemudian diligasi ke dalam vektor ekspresi pTrcHis A yang telah direstriksi dengan enzim yang sama. Produk ligasi selanjutnya ditransformasi ke dalam E. coli BL21. Klon rekombinan dikonfirmasi melalui PCR koloni dan analisis restriksi plasmid rekombinan. Hasil. Ligasi gen Rv3875 ke vektor ekspresi pTrcHis A menghasilkan plasmid rekombinan pTrcHis A – 3875 berukuran 4663 bp. Transormasi ke E. coli BL21 menghasilkan klon rekombinan yang membawa plasmid rekombinan pTrcHis A – 3875 yang dikonfirmasi melalui PCR koloni dengan diperoleh pita DNA gen Rv3875 berukuran 306 bp. Hasil analisis restriksi yang menunjukkan gen Rv3875 berhasil dipotong dari plasmid sehingga terbentuk 2 pita DNA spesifik (gen sisipan dan vektor). Kesimpulan. Gen Rv3875 berhasil diligasi ke vektor ekspresi pTrcHis A dan tranformasi ke E. coli BL21 berhasil dilakukan. Klon rekombinan terkonfirmasi membawa plasmid rekombinan yang dikarakterisasi pada PCR koloni dan analisis restriksi.

Keyword : ligasi; Rv3875; pTrcHis A; transformasi; E. coli BL21.